Las Ayudas Serono de Investigación 2002 fueron presididas por Dña. Ana Pastor, Ministra de Sanidad y otorgadas a 4 proyectos de las áreas de Endocrinología y Metabolismo, Investigación Clínica en Endocrinología y Metabolismo, Reproducción e Investigación Clínica en Esclerosis Múltiple.

Área de Endocrinología y Metabolismo


Proyecto de Investigación:

Expansión ex vivo de linfocitos t inmunoreguladores CD4+ CD25+ específicos para autoantígenos pancreáticos. Estudio de su potencial como immunosupresores naturales en el tratamiento de la diabetes autoinmune después del transplante de islotes alogénicos.

Investigador Principal:

Dra. Concepción Mora Giral

Resumen del proyecto:

La diabetes mellitus de Tipo 1 es una enfermedad autoinmune causada por la destrucción selectiva de las células beta pancreáticas de insulina por el sistema inmune. El modelo animal de diabetes mellitus de Tipo 1 que más se asemeja a la diabetes del mismo tipo en humanos es el modelo murino NOD (Non Obeses Diabetic). En cualquier caso, se desconoce el factor o factores iniciales que desencadenan este ataque inmunológico de las células beta. Para recuperar la homeostasis glucídica en estos pacientes se requiere la aportación exógena de insulina. Aún así, la normoglicemia deseada no se consigue durante todas las horas del día y este tratamiento es insuficiente para evitar la aparición de complicaciones crónicas degenerativas. Se impone la reposición de las células beta destruidas, y el método más viable para conseguir la restauración de la masa beta celular hasta el momento es la aplicación del transplante pancreático. El transplante de células beta aisladas o de islotes, ofrece ventajas teóricas respecto al transplante del órgano entero, tales como, una morbilidad y mortalidad reducidas, ya que no requiere cirugía mayor y, sobretodo, permite diseñar estrategias para evitar el rechazo del injerto o la destrucción autoinmune (previa micro-encapsulación de los islotes, inmunosupresión antígeno-específica con células T autólogas reguladores, tal y como proponemos en la presente solicitud).

La media de la masa beta celular para que un paciente diabético de tipo 1 se convierta en normoglicémico después del transplante, se encuentra alrededor de un millón de islotes. Esta cantidad de islotes es demasiado alta en relación a un páncreas normal (600000 islotes), muy probablemente debido a factores relacionados con la replicación, apoptosis, revascularización e inervación post-transplante.

Después del transplante, en ausencia de inmunosupresores, existe una elevada probabilidad de un rebrote de la diabetes debido al rechazo del injerto y/o a recurrencia del proceso autoinmune. Para evitarlo, el tratamiento más común consiste en la administración de drogas inmunosupresoras órgano-inespecíficas que actúan impidiendo las distintas respuestas policlonales a autoantígenos y a aloantígenos (incluyendo aloinjertos y antígenos patogénicos, etc)l. Sin embargo, ciertas drogas inmunosupresoras (corticoides, ciclosporina y tacrolimus) tienen un efecto diabetogénico claramente definido. La eliminación selectiva de ciertas subpoblaciones de células T in vivo puede romper la tolerancia hacia autoantígenos (autotolerancia) y, como consecuencia, desencadenar enfermedades autoinmunes. La tolerancia a autoantígenos en individuos sanos puede entenderse como el resultado de 4 mecanismos actuando simultáneamente para contrarrestar la existencia de células T autoagresivas: deleción clonal, anergia, ignorancia inmunológica e inmunosupresión o inmunoregulación de células T autoagresivas. Cuando el equilibro entre estos cuatro mecanismos se rompe, aparece la autoinmunidad.

La subpoblación de células T reguladoras (o inmunosupresoras) mejor caracterizada en el ratón y en humanos ha sido la subpoblación de células T CD4+CD25+. Estos marcadores de superficie definen una población de células T que constitutivamente expresa la cadena ? (CD25) del receptor IL2 en su superficie. Esta subpoblación de linfocitos T CD4+CD25+ parece emerger del tiempo como un linaje diferente, no prolifera en respuesta a la activación del TCR (anergia) e inhibe la proliferación de células CD4+CD8- o CD4-CD6+. El comportamiento inmunosupresor de los linfocitos CD4+CD25+ requiere la presencia de la molécula coestimuladora CTLA-4 en la superficie celular y puede ser revertida in Vitro utilizando elevadas dosis de IL-2 o utilizando anticuerpos agonistas anti-CD28. es interesante remarcar que en entre dl 5% y el 10% de las células TCD4+ periféricas de ratones sanos no inmunizados, corresponden a este fenotipo regulador. Cuando esta subpoblación de linfocitos T CD4+CD25+ es eliminadas en ciertas cepas de ratones predispuestos a procesos autoinmunes. Los ratones desarrollan varias clases de enfermedades autoinmunes.

Interesantemente, también se ha demostrado la existencia de células T reguladoras CD4+CD25+ en humanos.

El objetivo del presente proyecto es eliminar la necesidad del tratamiento inmunosupresor inespecíficos después del transplante mediante la infusión de células T reguladoras autólogas (propias) específicas de antígenos pancreáticos.

A causa de los importantes efectos perjudiciales asociados al tratamiento inmunosupresor inespecífico de larga duración que actualmente se lleva a cabo después del transplante, nosotros proponemos una estrategia para desarrollar inmunosupresión selectiva para linfocitos T específicos de antígenos de islotes que evite la recurrencia del proceso autoinmune sin por ello forzar una inmunosupresión generalizada. Una de las mejores alternativas a las drogas inmunosupresoras es el uso de las células T reguladora autólogas (propias) que están presentes de forma natural en humanos y ratones, y por tanto, también en individuos candidatos al transplante de islotes. Las células reguladoras mejora caracterizadas son los linfocitos T CD4+ que expresan constitutivamente en su superficie el marcador CD25. Proponemos aislar estas subpoblación de linfocitos a partir de timo, bazo y nódulos linfáticos pancreáticos de ratones NOD, expandir in Vitro aquellas células T CD4+CD25+ específicas para insulina (autoantígeno específicos de las células beta), comprobar que mantienen sus propiedades inmunosupresoras después de la expansión in Vitro. Las células CD4+CD25+ específicas para insulina así expandidas serán reinfundidas en ratones NOD pre-diabéticos o bien, que hallan sufrido un transplante de islotes bajo la cápsula renal. Estos linfocitos CD4+CD25+ específicos para insulina deberían alojarse en los islotes pancreáticos solamente y provocar inmunosupresión en el ambiente insulínico, evitando así el proceso autoinmune.

Hipótesis del trabajo: Nosotros proponemos que las células T reguladoras CD4+CD25+ aisladas de timo, bazo y nódulos de ratones NOD, se pueden cultivar in Vitro en presencia de IL-2 y células presentadoras de antígeno (APCs) isogénicas cargadas con autoantígenos pancreáticos (insulina). Una vez expandidas in Vitro y comprobadas sus propiedades inmunomoduladoras, el enriquecimiento en estas células T reguladoras que reconocen los antígenos de las células beta, favorecerá su actuación órgano-específica en el órgano pancreáticos o bajo la cápsula del riñón donde el injerto de los islotes se localiza después del transplante. Esta localización órgano (islote) y antígeno-específica de las células inmunoreguladoras permitiría una inmunosupresión específica de linfocitos autoagresivos limitada estrictamente al medio-injerto pancreático y evitaría todos los problemas derivados de una inmunosupresión generalizada que es la que actualmente se utiliza.

Composición del Jurado:

Dr. D. Jesús Garagorri Otero, Dr. D. Luis Forga Llenas, Dra. Dña. Rosa Alpera Lacruz, Dr. D. Jesús Argente Oliver, Dr. D. Cristóbal Jorge del Valle Núñez, Dr. D. Ricardo Gracia Bouthelier, Dr. D. Francisco Rodríguez Hierro

Área de Investigación Clínica en Endocrinología y Metabolismo


Proyecto de Investigación:

Estudio de la relación entre el déficit de factor de crecimiento semejante a la insulina (IGF-1) y las alteraciones en el eje hipotálamo-hipófisogonadal. Parámetros de insulino-sensibilidad y metabolismo óseo en el varón con cirrosis antes y después de transplante hepático.

Investigador Principal:

Dr. Francisco Javier Salvador Rodríguez

Resumen del proyecto:

La insuficiencia hepática severa cursa con estigmas clínicos y analíticos de hipogonadismo que se asocian a osteoporosis y a trastornos en el metabolismo hidrocarbonado. Los elementos implicados en la fisiopatología de estos trastornos no son bien conocidos. Tanto alas alteraciones en el metabolismo de las hormonas sexuales como en los factores que regulan el metabolismo fosfocálcico son candidatos potenciales. Existen evidencias experimentales según las cuales la disminución en la concentración de IGF-1 que acompaña a la cirrosis hepática se relaciona con estas alteraciones que son corregibles mediante administración exógena de IGF-1. la influencia de IGF-1 sobre la esteroidogénesis, espermatogénesis y mineralización ósea es bien conocida. Adicionalmente, esta hormona cuya concentración circulante proviene fundamentalmente de su síntesis hepática, posee un efecto anabolizante en lo que respecta al metabolismo hidrocarbonado. Aún cuando se ha demostrado una mejoría parcial del hipogonadismo tras la realización de transplante hepático, no existen estudios en humanos que hayan demostrado qué elemento se encuentra implicado en esta variación.

La comparación entre la situación pre y postransplante representa un magnífico modelo de estudio para conocer qué mecanismos se encuentran involucrados en las alteraciones derivadas de la insuficiencia hepática severa. El presente estudio está diseñado para evaluar el papel del IGF-1 y sus proteínas transportadoras como mediador en al recuperación de las funciones biológicas postranspalnte hepático. Los resultados pueden constituir la base para contemplar la administración de IGF-1 como tratamiento sustitutivo de la insuficiencia hepática.

Composición del Jurado:

Dr. D. Jesús Garagorri Otero, Dr. D. Luis Forga Llenas, Dra. Dña. Rosa Alpera Lacruz, Dr. D. Jesús Argente Oliver, Dr. D. Cristóbal Jorge del Valle Núñez, Dr. D. Ricardo Gracia Bouthelier, Dr. D. Francisco Rodríguez Hierro

Área de Reproducción



Proyecto de Investigación:

Estudio de la expresión de la proteína transportadora de hormonas esteroideas sexuales (SHBG) y de los receptores de estrógenos beta (ER-B) durante la espermatogénesis y su posible implicación en los trastornos de fertilidad masculina.

Investigador Principal:

Dra. Francina Munell Casadesús

Resumen del proyecto:

La regulación de la progresión de la espermatogénesis por los andrógenos ha sido ampliamente demostrada aunque el mecanismo por el cual ejercen su acción aún no se conoce. La ausencia de receptores de andrógenos en las células germinales junto con la demostración de que estas células poseen actividad P450 aromatasa y receptores de estrógenos beta (ER?), sugiere que parte de las acciones de los andrógenos en la espermatogénesis están mediadas por los estrógenos. Por otr aparte, el estudio del ratón transgénicos sobreexpresor de la proteína transportadora de hormonas esteroideas sexuales humana (SHBG), ha puesto de manifiesto la existencia de una proteína alternativa de SVG (Alt SHBG) en el testículo humano, producida a partir de un promotor alternativo y de localización intracelular. La proteína SVG alternativa ha sido identificada en el acrosoma del esperma maduro tanto en el ratón transgénico para la SHBG humana como en el semen humano. El hecho de que esta proteína alternativa mantenga la región de unión a hormona sugiere que podría estar implicada también en al acción de lso estrógenos en las células germinales.

Los objetivos del presente proyecto son, por un lado, el estudio de la expresión de las isoformas de ER? y de la SHBG alternativa en el testículo humano y, por otro, el análisis de su expresión en varones afectos de problemas de fertilidad. Específicamente, nos proponemos identificar y localizar la expresión de los RNH mensajeros y de las proteínas AltSHBG, ER? y ER? cx (variante de ER? producida por spolicing alternativo) en el testículo normal adulto y durante el desarrollo y en el semen humano, así como el compartimento celular en el que realizan su acción, comprobar la unión de las proteínas AltSHBG y ER? al estradiol en el espermatozoide y estudiar las variaciones de expresión de AltSHBG, ER? y ER? cx en varones afectos de problemas de fertilidad.

Composición del Jurado:

Dr. D. José Luis Ballescá Lagarda, Dr. D. Joaquín Calaf Alsina, Dr. D. Federico Galera Fernández, Dr. D. Antonio Luis González Utor, Dr. D. Julio Herrero García, Dr. D. Alberto Romeu Sarrió, Dr. D. Federico Pérez Milán

Área de Investigación Clínica en Esclerosis Múltiple


Proyecto de Investigación:

Determinación de la expresión del receptor de interferón tipo I (IFNAR) en pacientes con esclerosis múltiple tratados con interferón beta y su relación con la disminución de la eficacia terapéutica del interferón.

Investigador Principal:

Dr. Oscar Fernández Fernández

Resumen del proyecto:

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad neurodegenerativa para la que se ensayan diversos tratamientos, entre los que el IFN-beta se ha mostrado eficaz en un alto porcentaje de pacientes. Sin embargo, existen enfermos en los que no se produce ese efecto beneficioso y todos los esfuerzos de nuestro grupo en los últimos años van encaminados a descubrir las posibles causas de esta disminución de la eficacia terapéutica del IFN-beta. Una de las razones podría ser la presencia de anticuerpos neutralizantes frente al IFN-beta, pero en estos estudios realizados por nosotros y otros grupos no se ha podido demostrar claramente su participación en una pérdida de la eficacia.

Objetivo: Determinar en una cohorte de pacientes con esclerosis múltiple tratados con diferentes tipos de IFN-beta si la disminución en la eficacia terapéutica del IFN-beta se debe, a diferencias en la expresión del receptor celular para el interferón FINAR en la superficie linfocitaria. Además se va a determinar si existen diferencias en la expresión de cada una de las subunidades (IFNAR1 e IFNAR2) que componen el receptor. Todo ello se correlacionará con el estado clínico del paciente y con la presencia de anticuerpos neutralizantes frente a IFN-beta en muestras procedentes de dichos pacientes.

Ámbito del estudio: Servicios de Neurología del Complejo Hospitalario Carlos Haya de Málaga. Laboratorio adscrito a la Unidad de Investigación del C.H. Carlos Haya.

Metodología: La actividad clínica de la enfermedad quedará registrada en un protocolo a lo largo del período de seguimiento. La determinación del receptor del IFN tipo I se realizará mediante la cuantificación de la expresión de su mRNA en células mononucleares por RT-PCR a tiempo real.

Composición del Jurado:

Dr. D. Txomín Arbizu Urdiaín, Dr. D. Bonaventura Casanova i Estruch, Dr. D. Juan Antonio García-Merino, Dr. D. Francisco Leyva-Cobián, Dr. D. Jorge Matias-Guiu, Dr. D. Xavier Montalbán Gairín, Dr. D. Pedro Conthe Gutiérrez